引物的作用是什么?

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引物(primer)是指一段人工合成的与模板DNA序列互补的单链核苷酸片段,可诱导DNA分子复制。在PCR扩增中,引物与模板DNA结合,引导RNA聚合酶沿着DNA双链前进,合成与引物互补的mRNA,继而合成新的DNA。由于mRNA半衰期短,容易降解,且不能整合进基因组而只存在于细胞质内,因此可以通过反相HPLC、凝胶电泳等方法检测其含量以判断引物的浓度和完整性。 引物的设计对于获得的DNA片段进行进一步分析具有重要的作用。常用的引物设计软件有Primer3、Oligo及MegAlign等。其中,Primer3可以同时考虑目标序列的扩增特异性以及引物设计的多源性,是应用最为广泛的引物设计软件之一。

目前,许多实验室都拥有属于自己的引物库,用于查找合适的引物;还有一些数据库也收集了各种不同目的基因的引物,可为科研工作者提供相应的参考信息。例如,NCBI的核酸数据库GenBank收录了来自世界各地的各种核酸序列,可以在互联网上免费搜索,还可以下载用于后续的分析和利用;

Eurofins MWG Operon的Primer Bank则是一个线上引物库,提供了超过1200万个已经验证的引物和探针,可以方便地搜索和获取用于特定研究项目的引物。还有一些公司建立了专门的引物专利网站,提供专利文献资料,可供选择购买合适引物。 对于基因表达谱分析、遗传图谱扫描或连锁分析等,可能需要更多段的引物。这些引物两端的序列通常是已知的,而中间需要延伸的部分可通过基因芯片或大规模测序技术获得。

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